1. No category

20.05.2015
Analysering av HbA1c –
vurdering av unormale kromatogram sammen med hematologiske parametere
BFI 19. mai 2015
v/ bioingeniør Gro Nielsen
Hva er HbA1c?
• Normalt hemoglobin hos voksne består av 2 alfakjeder og 2
bettakjeder med hver sine hemegrupper (Fe++).
• Glykosylert hemoglobin (HbA1c) er et glykoprotein dannet ved en
irreversibel reaksjon mellom glukose og bettakjeden i
hemoglobinet.
• Verdien reflekterer det gjennomsnittlige blodglukosenivået de
siste 6-10 ukene før prøvetaking.
• HbA1c avhenger av normal levetid for erytrocyttene. Nedsatt
levetid gir falsk for lave resultater. Hemolytiske anemier,
medikamenter,eks Rivavirin (hep.C).
2
1
20.05.2015
Changes in globin expression during embryonic,
fetal and adult life
α-chain
β-chain
γ-chain
22
22
22
HbA1
HbA2
HbF
δ-chain
0
-6 months
Birth
6 months
3
HbA1c – diagnostisk test
Kriterier:
• HbA1c > 6,5 %
• Fastende glukose >7,0 mmol/L (hvis ikke HbA1c kan benyttes)
• 2 timers venøs glukose etter 75 g oral glukose >11,1 mmol/L.
4
2
20.05.2015
3 elueringsbuffere
Instrument - TOSOH G8
Kolonne
Hemolyseløsning
250 prøver pr. døgn
4µL blod fortynnes med hemolyseløsning, 1:200. De ulike Hb-fraksjonene bindes til kolonnen.
Elueringsbufferne ”drar” med seg fraksjonene som er bundet, til detektoren.
5
Analysekvalitet - presisjon
• CVa (langtidsCV):
HbA1c nivå ca 6 %: CVa= 0,7 %. Kontrollmateriale, EDTA-blod
HbA1c nivå ca 9 %: CVa= 1,0 %. Kommersiell kontroll, liquid.
Kontrollmaterialene er uavhengige, dvs ikke fra
instrumentleverandør.
• Tillatt total feil: TEa = 3 - 4 %
6
3
20.05.2015
Analysekvalitet - riktighet
Ekstern kvalitetsvurdering (Noklus)
• Bias ca +2 % (med ny TOSOH kalibrator).
Ingen faktorisering på AHUS.
• Biaskrav +/- 2,3 % ved kolonnebytter.
• Små kolonnelot-variasjoner.
7
Normalt HbA1c- kromatogram
*6 topper
*Retensjonstid ok
*Areal ok
*Teoretisk
plateverdi ok
økende
bindingsstyrke
til kolonnen
Retensjonstid i min.
8
4
20.05.2015
Hemoglobinopatier
• Syntesesvikt
Talassemier (β og α)
• Mutasjoner i kjedene
Ulike varianter (D, S, C og E)
9
Thalassemi vs hemoglobinvariant
β - globinkjede
α - globinkjede
Normal
β-thalassemi
α-thalassemi
Hb-variant
10
5
20.05.2015
Forekomst av hemoglobinopatier
(Etnisk norske har ingen)
Talassemier
HbD
HbC
HbS
HbE
11
Unormale kromatogram – hemoglobinopati ?
Hva kan fanges opp med HbA1c kolonnene?
β-talassemi minor
Fanges opp dersom HbF er litt
forhøyet og hematologiske
parametere samt etnisitet tilsier
at det kan være talassemi.
β-talassemi major
Gir kjempehøye HbF
Ulike hemoglobinvarianter
Gir >6 topper:
HbD, HbS, HbC, HbE og varianter
som gir uklassifiserte ekstratopper.
α- talassemier fanges ikke opp med kromatografi. Gentester.
12
6
20.05.2015
Unormale kromatogram - Hvilke parametere vurderes?
β-talassemi minor
*HbF (evt hemoglobintyping)
*Hb
*MCV
*MCH
*RDW
*Morfologiske funn
*Etnisitet
*Lett forhøyet HbF (evt høy A2)
*Normal eller litt lav
*<70 (ofte veldig lave)
*<27
*Normal
*Evt. target celler
Sør-øst Asia
β-talassemi major
*HbF (evt hemoglobintyping)
*Hb
*MCV
*MCH
*RDW
*Morfologiske funn
*Etnisitet
Kjempehøy HbF (>70 %)
Lav
Lav
Lav
Forhøyet (blodoverføringer)
Target celler/anisopoikilocytose
Sør-øst Asia
Ulike hemoglobinvarianter
HbD, HbS, HbC, HbE.
Kombinerte hemoglobinopatier?
(Hb, MCV osv)
>6 topper. HbSS gir sigdceller.
Ellers normale hematologi funn.
Kombinerte patier? Lav MCV
(jernmangel – ferritin ??)
13
Hemoglobinopatier- varianter
Sannsynlig D-variant
HbA1c kan gis
ut med tillegg:
Funn av
variant.
HbD
Som regel
normale
hematologiresultater
14
7
20.05.2015
Hemoglobinopatier- varianter
Sannsynlig S- variant
HbA1c kan
gis ut med
tillegg:
Funn av
variant.
HbS
Som regel
normale
hematologiresultater.
Evt
sigdceller
15
Hemoglobinopatier- varianter
Sannsynlig C- variant
16
8
20.05.2015
Hemoglobinopatier- varianter
Sannsynlig E- variant
Tillegg til
svaret:
Utført på
alternativ
metode.
Funn av
variant.
(HbA2 > 10%)
17
Hemoglobinopatier- føtalt hemoglobin (↑)
Økt mengde HbF (lite barn)
HbA1c
kan gis
ut.
HbF=
<15 %
18
9
20.05.2015
Hemoglobinopatier- Talassemi
β- Talassemi minor (og diabetes):
HbA1c kan
ikke
rapporteres.
Diabetes med lav HbA1C.
Nedsatt levetid på RBC?
OBS!
HbF+ LabilA1c
>15 %.
Hb,MCV, MCH, RDW ??
19
Hb-typing. Normalt kromatogram
HbA0
Talassemi
major?
HbF >
70 %
Talassemi
minor?
HbA2 > 4 %
Hemoglobinvarianter
(hetero/homozygot)
20
10
20.05.2015
HbE på TOSOH G8 - kombinert hemoglobinopati?
Pasient NN
Høy
HbA2
(HbE)
HbE + høy
HbA2 ??
21
HbE på kapillærelektroforese – HbE og HbA2 topp
Pasient NN
HbA2
22
11
20.05.2015
Takk for oppmerksomheten!
23
12