Diagnostik af urinvejsinfektioner
Diagnostik af urinvejsinfektioner Kirsten Paulsen Afsnitsledende bioanalytiker og laboratoriefaglig konsulent Klinisk Mikrobiologi Aalborg Universitetshospital Kirsten Paulsen, november 2015 Lægedage Facts om UVI • Årsag til 2 – 5 % af alle henvendelser i almen praksis • Forårsages af: – – – – E. coli Enterokokker Klebsiella, Proteus og andre Gram negative stave Staphylococcus saprophyticus • Forårsages ved at tarmens bakterier koloniserer blæren Lægedage Diagnostik af urinvejsinfektioner • Stiks • Mikroskopi • Dyrkning • Resistensbestemmelse Lægedage Overvejelser inden undersøgelse af urin • Hvorfor er prøven taget? Symptomer? • Hvornår, hvor og hvordan er prøven taget? • Hvordan er prøven opbevaret? Lægedage Prøvetagning • Midtstråleprincippet: For at undgå tilblanding af bakterier fra urethralåbningen: patenten lader en portion urin i toiletkummen for at skylle urethra. Herefter lader patienten atter vandet, og der opsamles 10-20 ml urin i et rent engangsbæger. Urin skal have stået i blæren i mindst 2 timer. Lægedage Opbevaring og forsendelse Opbevaring af ukonserveret urin skal ske på køl Forsendelse: – Borsyreglas (skal sås ud indenfor 48 timer) • tilstræbe 10 ml urin – Borsyre: • tillader overlevelse af bakterier • hindrer vækst af bakterier • reelle bakterietal ved dyrkning Lægedage E. coli - væksthastighed Lægedage E. coli - væksthastighed Straks efter prøvetagning Lægedage Efter 3 timer Efter 6 timer Dyrkning og resistensbestemmelse af urin i Almen Praksis Lægedage Dyrkning • Kromogen agarplade – CPSE, ID Flexicult m.fl. • Dipslide – Uricult – Uricult Trio • Flexicult Urinkit til D+R Lægedage Kvalitetskrav til dyrkning på urin • Vækstgrad, dvs. antal bakterier pr. ml urin – – – – ≤ 103 104 105 > 105 • Florasammensætning – Renkultur – Blandingskultur – (Dominans af en enkelt organisme) Lægedage Kromogen agarplade • Agarplade, der er tilsat substrater (f.eks. aminosyrer), der muliggør påvisning af bestemte enzymer→ farveudvikling F.eks: – – – – β – galaktosidase β – glucoronidase β – glucosidase deaminase • Bestemme arten af bakterier – Identifikation af E. coli, enterokokker, Proteus og KESC – Renkultur / blandingskultur Lægedage Kromogen agarplade • Kvantitativ udsåning med 10 μl engangsøse – Beregne vækstgraden Lægedage 10 µl urin antal kolonier Antal bakterier / ml 0 < 102/ml 1 - 10 102 – 103/ml 10 – 100 103 – 104/ml ca.100 ca.104/ml 100 – 1000 104 - 105/ml ca.1000 ca.105/ml 10 – 100 kol. Dipslide • Rektangulær plade beklædt på begge sider med 2 – 3 forskellige dyrkningsmedier: • Cled agar: – Tillader vækst af de fleste typer bakterier • MacConkey agar: – Tillader vækst af Gram negative stave og i mindre grad enterokokker • E. coli agar: – E. coli vokser med sorte kolonier mens andre bakterier vokser med farveløse kolonier • Tilsås ved at dyppe sliden to gange i urinen eller med pipette således begge flader er helt tildækket Lægedage Aflæsning af dipslide • Bedømme vækstgraden – Spredt vækst svarer til 103 – 104 bakterier pr. ml urin – Sammenflydende eller næsten sammenflydende vækst svarer til 105 – 107 bakterier pr. ml urin • Renkultur eller blandingskultur • Ved Uricult trio – E. coli / ikke E. coli Lægedage Aflæsning af dipslide CLED-siden Ingen vækst Negativ (grøn/gul) + vækst (kan både være kokker og stave) MacConkey-siden + vækst Lægedage Stave Ingen vækst Kokker Dipslide - begrænsninger • Vanskeligt at se blandet flora • Tolkning af sammenflydende vækst af ikke laktose forgærende bakterier, kan fejltolkes som negativ Lægedage Flexicult • Den fortæller Aase om senere Lægedage Dyrkning om fredagen? • Kromogen agarplade eller dipslide: – – – – Tilså som vanligt Lad agarplade/dipslide stå på bordet indtil mandag Hvis vækst på agarplade/dipslide mandag – aflæs Ingen vækst mandag – inkuber agarplade/dipslide til tirsdag Lægedage Resistensbestemmelse metoder i almen praksis • Agarplade med disks / tabletter – agardiffusion • Flexicult Lægedage Resistensbestemmelse bør aldrig stå alene – men altid ledsages af dyrkning • ikke muligt at vurdere vækstgrad (antal CFU/ml) • ikke muligt at vurdere florasammensætning • renkultur / blanding • tilblanding fra hud og slimhinder • ikke muligt at vurdere art Lægedage Agardiffusion • Resistensplade – Mueller Hinton agar • Antibiotikadepot (tablet / disk) – Disks fra Oxoid • Opbevares på køl • Holdbarhed i 1 uge – Neosensitabs fra Rosco • Opbevares ved stuetemperatur • Holdbarhed i 12 mdr. Lægedage Fremgangsmåde • Pladen tilsås med vatpind i to retninger • Tablet / disks anbringes • Pladen inkuberes straks ved 35 – 37 ˚C • Aflæses efter 16 – 20 timer Lægedage Inokulum Semikonfluerende Lægedage Konfluerende (tæt vækst) Aflæsning • Bakterietætheden vurderes – Ingen vækst – Tynd vækst – Semikonfluerende – Konfluerende Resistensbestemmelsen må ikke aflæses • Renkultur / blandingskultur? – Bakterieart (Gram positiv / Gram negativ) Lægedage Aflæsning • Zonediameteren måles – Lineal/skabelon – Aflæses fra bagsiden mod sort baggrund med belysning rettet mod pladen • Resultatet tolkes – Resistent (R) – Sensitiv (S) Lægedage Resistensbestemmelse fredag? NEJ! Lægedage Fejlkilder • Medie /agarplade – opbevaring • Inokulum – udsåning • Antibiotika koncentration (disk fra Oxoid) – opbevaring • Temperatur på varmeskab • Tid fra udsåning til pladen stilles i varmen Lægedage Fejlkilder og faldgruber • For tynd vækst • Sværmende Proteus • Aflæsning af sulfametizol og trimetoprim • Gærsvampe • Flere bakterier i samme prøve Lægedage Inokulums betydning Eneste forskel er inokulum Lægedage Sværmende Proteus Lægedage Fejlkilder og faldgruber • Gærsvamp Lægedage Fejlkilder og faldgruber • Klebsiella og tilblanding Lægedage Kvalitetskrav til resistensbestemmelse Vurdere om den undersøgte bakterie er følsom (S) eller resistent (R) Lægedage Dyrkning og resistensbestemmelse i almen praksis • Uddannet personale • Søge oplysning vedr. materialer og deres anvendelsesområder • Deltage i kvalitetskontrolprøver Lægedage
© Copyright 2024